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果纳芬不要求冷藏，在零下3度冬天的室内温度也是比较适合果纳芬储存的，因为果纳芬只要储存在2到25度的环境中就可以。不过需要注意的是，要放在阴凉干燥的地方，避免被阳光直射。而放在冰箱冷藏的季节大多是在夏天，夏天温度过高会使药物内的蛋白质分解，从而产生出对人体有害的物质，而冬天的室内是可以常温储存的。

果纳芬是一种比较常规的促排药物，一般适用于卵巢功能不是很好的女性。而果纳芬注射时间和存储时间一定要严格按照医嘱来进行。下面是果纳芬的具体储藏要求：

1.未开封的果纳芬注射笔需要在2-8℃的温度冷藏，不能冷冻保存，冷冻后药物是不能使用的；

2.开封后的果纳芬注射笔需要在25℃以下避光保存，开封后最多能够放28天，超过28天就要丢弃，不可以继续使用；

3.正常的果纳芬注射笔内的药液澄清透明，若出现浑浊、沉淀就不能使用。

怀孕1-3月禁吃的十大水果清单中没有苹果。孕妇在孕早期，胎儿还不稳定的时候一定要注意饮食和休息，避免因为这些对腹中胎儿造成伤害。怀孕1-3月中禁吃的水果主要包括高糖分、以及热性和寒性的水果，高糖分的水果可能会引起准妈妈血糖升高，而寒性水果对胎儿的发育不利。因此准妈妈们在怀孕期间应该尽量避免食用这些水果，可以适当补充其他中性水果来增加维生素。

孕期适当多补充一些维生素是对身体有益的，但怀孕期间的女性很容易上火和过敏，严重时可能会导致高血压、腹泻、糖尿病、流产等症状，因此在选择水果时因避开以下十种怀孕1-3月禁吃的水果：

1.山楂，山楂味道酸甜，是许多孕妇都很喜欢吃的水果，但山楂可能会导致女性的子宫收缩，因此孕期应尽量不吃或少吃；

2.木瓜，木瓜性寒，且其所含成分会影响孕妇体内的激素水平，木瓜中还含有木瓜苷，也可能导致孕妇子宫收缩，严重的会导致早产或流产；

3.龙眼，龙眼属于热燥的水果，女性在孕期吃龙眼可能引起上火、腹痛等情况；

4.菠萝中丰富的蛋白酶很容易引起过敏体质的人的不适，因此孕妇也应该少吃或不吃菠萝；

5.荔枝，荔枝容易导致人体便秘和口干，且孕期的妇女一般属于阴虚体质，多食容易导致先兆流产；

6.西瓜，西瓜属于寒性水果，孕妇多吃可能会伤脾、助湿；

7.榴莲，榴莲属于高糖分的热性水果，多食可能会导致胎儿发热和孕妇血糖升高的问题；

8.桂圆，桂圆服用过多容易导致胎儿躁动以及孕妇上火；

9.甘蔗，甘蔗的含糖量过高，孕妇食用后容易血糖升高，严重的可能会导致糖尿病；

10.杏，杏子里面的化学元素含量过高，容易造成孕妇拉肚子。

ELISA样本制备指南及注意事项

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定义及介绍

ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附测定）是最基础的免疫学实验之一，其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本，实验操作步骤并不繁琐，但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值，从而供下一步分析所用，因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。

样本制备指南

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血清

全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃，1000×g离心20min，取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血，高血脂样品

2.血浆

抗凝剂推荐使用EDTA-Na

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，样品采集后30min内于2-8℃，1000×g离心15min，取上清即可检测。

3组织匀浆/组织全蛋白

用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃，5000×g离心5-10min，取上清检测。

其余方法：在分析天平（AL204型）上，称量50-100mg组织样本。在样本中加入5倍质量体积的含1%PMSF的1×PBS缓冲液；并用小剪刀等工具将组织样本剪碎（尽可能小块）。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开超声破碎仪，将超声破碎仪的功率调至25%，超声时间2s，间隔时间5s，总时间2min。放入样本，冰上超声3min。视样本匀浆情况调整总时长。超声完成后，将样本放于4℃或冰上裂解30min。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。

组织匀浆液或组织全蛋白中的蛋白浓度对于检测实验的影响至关重要，建议样本蛋白浓度至少1mg/mL以上，较低浓度蛋白的组织匀浆液有可能导致ELISA检测失败。

4.细胞提取液

贴壁细胞

用冷的PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5min后收集细胞；

悬浮细胞

可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10

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个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10min，取上清检测。注：留取20μL样本，用于后续BCA测定。

其余方法：

对于

贴壁细胞

：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。

对于

悬浮细胞

：离心收集细胞，以2×10

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细胞为例，在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液，震荡混匀细胞，4℃或冰上裂解30min。用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成（5-10）×10

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细胞/管，然后再裂解。必要时可以进行超声处理，超声步骤与组织样本相同。注：1×PBS缓冲液使用前，需加入PMSF，现用现加，PMSF终浓度为1mM。打开离心机，将转速调至12000×g；将样本放入离心机，离心10min，取上清，按需要分装，于-20℃贮存。注：留取20μL样本，用于后续BCA法测定样本蛋白含量。

5.细胞培养上清或其他生物体液

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收集液体后于2-8℃，1000×g离心20min，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。注：因细胞培养基中的胎牛血清影响或其他生物体液中杂蛋白的影响，不建议进行BCA法测定样本蛋白含量。

实验细节与注意事项

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收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎，释放大量的过氧化物酶，会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AP）的酶促反应，造成检测结果的不确定性。

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样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃(3个月内检测)，避免反复冻融。在检测前，冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。

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试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围，建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低，请对样本做适当的稀释或浓缩。

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检测样本的稀释推荐多步稀释法，常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍；细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍；建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。

对于稀释倍数比较大的检测样本，参考稀释方案如下：

稀释100倍：一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内，做100倍稀释；

稀释1000倍：两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内，做20倍稀释，再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释1000倍；

稀释100000倍：三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内，做40倍稀释，再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内，做50倍稀释，总共稀释100000倍；

每步稀释时取液量不少于3μL，稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀，避免起泡。

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若所检样本不在说明书所列样本之中，建议做预实验验证其检测有效性。

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若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。

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某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。

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对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本，经BCA法测定样本蛋白含量后，建议进行蛋白浓度的统一化，避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差；例如，统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL，进行后续的稀释和检测。

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